2014年10月07日
ついにデビュー
ゼブラフィッシュデビュー。とはいえ、野生型のゲノムを共同研究者から貰ってきてPCRかけただけなんですが。しかし他のラボと実験やるのも難しい。プロトコールが違うのよね。
ダイレクトシークエンスで変異のある魚を見つけたいわけなんですが、 その共同研究者のプロトコールではnestedをかけて、nestedのプライマーにM13のシークエンスくっつけてM13のプライマーで読むんですって。
一応nestedのプライマーも注文したけど、M13はつけず、、だってそのプライマーで読んだらええやん、と思ったので。彼らのプロトコールだと、確かに1stではかからず2ndでバンド確認。私がちょっと変更した方法だと1stでバキバキにシングルバンドが出た(w シークエンスの結果が戻って来たら、今度は魚のひれ切ってgenotypingです。
いつぞやの5'RACEのおかげで、やっと全長クローニングができそうです。
ダイレクトシークエンスで変異のある魚を見つけたいわけなんですが、 その共同研究者のプロトコールではnestedをかけて、nestedのプライマーにM13のシークエンスくっつけてM13のプライマーで読むんですって。
一応nestedのプライマーも注文したけど、M13はつけず、、だってそのプライマーで読んだらええやん、と思ったので。彼らのプロトコールだと、確かに1stではかからず2ndでバンド確認。私がちょっと変更した方法だと1stでバキバキにシングルバンドが出た(w シークエンスの結果が戻って来たら、今度は魚のひれ切ってgenotypingです。
いつぞやの5'RACEのおかげで、やっと全長クローニングができそうです。